產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
一步法PCR抑制劑清除試劑盒|快速有效去除PCR抑制劑
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
規(guī)格 |
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AX101 |
BcMag公司? 一步PCR抑制劑去除試劑盒 |
1毫升 |
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AX102 |
BcMag公司? 一步PCR抑制劑去除試劑盒 |
5毫升 |
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簡(jiǎn)介
在過(guò)去幾十年中，經(jīng)過(guò)不斷發(fā)展，PCR技術(shù)已經(jīng)成為最有效的分子生物學(xué)實(shí)用工具之一。然而，從不同生物樣本中提取出的DNA模版，通常都回含有各種各樣的PCR抑制劑，這些抑制劑會(huì)干擾PCR的正常擴(kuò)增。 PCR抑制劑是一些能抑制聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）正常DNA擴(kuò)增的化合物。PCR抑制劑通常會(huì)通過(guò)與DNA聚合酶的活性位點(diǎn)直接結(jié)合，來(lái)影響其發(fā)揮其作用，從而導(dǎo)致DNA擴(kuò)增的敏感性降低或完全失敗。因此，在PCR擴(kuò)增之前從DNA模版中去除PCR抑制劑對(duì)于所有下游應(yīng)用至關(guān)重要。
PCR抑制劑起源于哪里？
PCR抑制劑存在于各種生物材料（器官、血液、體液等）、環(huán)境樣品（水、土壤、空氣等）和食物（肉、奶、水果、蔬菜、海鮮等）中。此外，在運(yùn)輸、樣品處理（例如預(yù)濃縮過(guò)程）或核酸提取過(guò)程中可能會(huì)意外添加抑制物質(zhì)。PCR抑制劑可以來(lái)自原始樣品本身，樣品制備，DNA純化過(guò)程或骯臟的塑料制品等。表1列出了一些常見(jiàn)的PCR特異性抑制劑及其來(lái)源的例子。
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來(lái)源 |
抑制劑 |
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血液、肌肉組織 |
肝素、血紅蛋白、免疫球蛋白、蛋白酶、核酸酶、阿昔洛韋、激素、IgG、乳鐵蛋白、肌紅蛋白、膠原蛋白 |
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牛奶 |
蛋白酶，鈣離子 |
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大便 |
膽汁鹽、復(fù)合多糖、脂質(zhì)、尿酸鹽 |
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植物 |
果膠、多酚、多糖、木聚糖、葉綠素 |
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土壤 |
富里酸、腐殖酸、腐殖物質(zhì)、金屬離子、多酚 |
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樣品制備 |
KCl、SDS、二甲苯 |
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DNA純化 |
離液鹽、乙醇、異丙醇、苯酚、乙酸鈉 |
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臟塑料制品 |
蛋白酶，核酸酶 |
表1 PCR抑制劑
如何去除PCR抑制劑？
目前，經(jīng)常使用的幾種除抑制劑或降低其作用的方法。
1. 稀釋含有PCR抑制劑的樣品提取物。這種方式非常簡(jiǎn)單，但稀釋的DNA可能不足以成功擴(kuò)增DNA，并且隨著稀釋而降低靈敏度。
2. Chelex，例如Chelex1-100和基于苯酚-氯仿的方案。由于Chelex只能去除一些二價(jià)離子，因此這兩種方法都不能去除大多數(shù)PCR抑制劑。同時(shí)，苯酚-氯仿法只能清除脂質(zhì)和蛋白質(zhì)。
3. 柱式色譜法，例如Sephacryl S-400，Sephadex G-200和基于二氧化硅的離心柱或磁珠，可有效去除一些抑制劑，但該過(guò)程耗時(shí)費(fèi)力。
總之，盡管這些方法可以去除一些PCR抑制劑，但實(shí)際上它們具有以下局限性，例如：
1. 效率較低、耗時(shí)或需要大量手動(dòng)操作。
2.操作過(guò)程中DNA樣品的潛在損失。
3.高鹽溶液和乙醇可能殘留到到洗脫的DNA中。
4.它們不適用于高通量處理和自動(dòng)化設(shè)備。
因此，Bioclone公司研發(fā)出了一種基于磁珠法的新型高效PCR抑制劑清除試劑盒。
BcMag? One-Step PCR Inhibitor Removal Kit 是基于負(fù)相核酸純化技術(shù)的，一種一步法DNA純化試劑盒，可在PCR、RT和其他下游應(yīng)用之前，從不純凈的DNA樣品中一步去除PCR抑制劑。本試劑盒采用的磁珠是超順磁性的磁珠，并用我們專(zhuān)有的化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行了修飾。當(dāng)磁珠與含抑制劑的樣品混合時(shí)，磁珠會(huì)立刻捕獲并去除PCR抑制劑。同時(shí)，將純凈得DNA保留在溶液中，可用于所有下游應(yīng)用（圖1）。本款磁珠可以有效地去除許多常見(jiàn)的抑制劑，如多酚化合物、腐殖酸/黃腐酸、酸性多糖、單寧、黑色素、肝素、洗滌劑和牛仔布染料，以及二價(jià)陽(yáng)離子，如Ca2+、Mg2+等。
工作流程
操作過(guò)程非常簡(jiǎn)單快速：僅需一步，一管，一分鐘完成純化（如圖一）。只需將本款磁珠添加到待純化的DNA樣品中，使用振蕩器震蕩或使用移液器反復(fù)吹吸，就可以捕獲并清除雜質(zhì)，再使用磁珠分離器將磁珠沉淀到管底，此時(shí)，上清液中為純凈的待用DNA片段。不同于傳統(tǒng)的結(jié)合-清洗-洗脫過(guò)程，此過(guò)程中不使用任何有機(jī)溶劑，鹽類(lèi)或者EDTA等物質(zhì)，而且接近100%回收樣品。本款磁珠可在10分鐘以?xún)?nèi)，同時(shí)處理96個(gè)樣品，不需要昂貴的實(shí)驗(yàn)儀器，僅需實(shí)驗(yàn)常用渦旋設(shè)備，性?xún)r(jià)比非常高。
特點(diǎn)和優(yōu)勢(shì)：
l 簡(jiǎn)單的過(guò)程：不用移液，一步，一管
l 超快純化過(guò)程：一分鐘可以完成純化，處理96個(gè)樣品手動(dòng)時(shí)間不超過(guò)10分鐘
l 超高的純度和回收率：DNA片段（> 50bp）回收率> 90%
l 高效的清除效率：多酚類(lèi)化合物，腐殖質(zhì)酸，酸性多糖，單寧酸，黑色素，去垢劑，牛仔布染料，二價(jià)陽(yáng)離子如 Ca2+, Mg2+,等
l 無(wú)需純化柱，以及過(guò)濾器，不用費(fèi)力的反復(fù)移液吹吸，也不使用酒精。
l 高通量：可兼容多種不同的自動(dòng)化液體處理系統(tǒng)
運(yùn)輸和儲(chǔ)存：
l 收到后4℃保存，可儲(chǔ)存12個(gè)月
l 不可以冷凍
