產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
固定化TCEP二硫鍵還原磁珠
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱(chēng) |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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BH101 |
BcMag ? 固定化TCEP二硫化物還原試劑盒 |
100mg |
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BH102 |
BcMag ? 固定化TCEP二硫化物還原試劑盒 |
500mg |
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規(guī)格 |
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組成 |
表面連接有TCEP基團(tuán)的磁珠。 |
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磁化強(qiáng)度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類(lèi)型 |
超順磁 |
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有效密度 |
2.0克/毫升 |
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儲(chǔ)存狀態(tài) |
凍干粉 |
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有效濃度 |
TCEP濃度>12 mM/ml |
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存儲(chǔ) |
室溫運(yùn)輸，收到后保存在 4°C . |
TCEP磁珠可有效還原二硫鍵
使用我們的TCEP還原磁珠，可以輕松減少蛋白質(zhì)和肽中的二硫鍵。我們專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的磁珠不再需要耗時(shí)的分離程序。
簡(jiǎn)介
BcMag ? 固定化TCEP二硫鍵還原試劑盒（TCEP還原磁性基質(zhì)）使用我們專(zhuān)門(mén)設(shè)計(jì)的磁珠，可有效還原蛋白質(zhì)，多肽和其它含二硫鍵的分子中的二硫鍵（圖1）。TCEP（[三（2-羧乙基）膦]還原磁性基質(zhì)避免了耗時(shí)的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，不需要離心柱和分離柱操作，就可將還原樣品與還原劑分離。
固定化TCEP二硫化物還原磁珠，可以實(shí)現(xiàn)樣品和還原劑的快速分離回收。TCEP是蛋白質(zhì)，多肽和其他含二硫鍵的分子中有效的二硫鍵還原劑，對(duì)其他官能團(tuán)相對(duì)無(wú)反應(yīng)。三烷基膦TCEP在水溶液中穩(wěn)定，不會(huì)像其他還原劑如二硫蘇糖醇（DTT）和-巰基乙醇（BME）那樣快速氧化。TCEP對(duì)常見(jiàn)的巰基反應(yīng)性化學(xué)物質(zhì)（例如馬來(lái)酰亞胺交聯(lián)劑）幾乎沒(méi)有影響。盡管如此，許多實(shí)驗(yàn)要求被還原樣品與還原劑需要進(jìn)行分離操作。
磁珠比傳統(tǒng)的色譜法（例如純化柱，瓊脂糖或非磁性樹(shù)脂）具有顯著的優(yōu)勢(shì)?；诖胖榈母袷娇梢栽诙虝r(shí)間內(nèi)快速高產(chǎn)率處理96個(gè)樣品，各種樣品的回收率達(dá)到95%以上。而當(dāng)使用基于色譜柱的技術(shù)時(shí)，在學(xué)術(shù)研究實(shí)驗(yàn)室中處理多個(gè)樣品時(shí)，可能需要大量的手動(dòng)移液操作。這種實(shí)驗(yàn)方式可能會(huì)造成不同人員進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，目標(biāo)生物分子回收效率的差異。實(shí)驗(yàn)員和學(xué)生可能需要廣泛的培訓(xùn)和實(shí)踐才能實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的蛋白質(zhì)回收率。相比較傳統(tǒng)方法，磁珠具有許多優(yōu)點(diǎn)，例如它們易于使用，快速的實(shí)驗(yàn)方案，適用性以及高通量自動(dòng)化和小型化處理的便利性。
特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)：
? 回收率高，不含還原劑-----去除還原劑同時(shí)，在不損失樣品的情況下回收被還原的分子，是DTT或巰基乙醇（BME）很難實(shí)現(xiàn)的。固定化TCEP使您能夠在不進(jìn)行透析或脫鹽的情況下，以高收率（90%或更高）回收蛋白質(zhì)/多肽。
? 無(wú)任何異味----與DTT或BME不同，固定化TCEP是無(wú)味的，可以在普通操作臺(tái)上進(jìn)行還原。
? 穩(wěn)定性好-----固定化的TCEP穩(wěn)定性消除了在處理，使用或儲(chǔ)存固定化的TCEP二硫化物還原磁珠時(shí)，需要進(jìn)行防止氧化的特殊措施的需要。
易于使用-----固定化TCEP還原磁珠，在您使用時(shí)，可根據(jù)需要分配每個(gè)實(shí)驗(yàn)所需的用量。可以在不同的pH值（從4到9）和溫度（5到95°C）下進(jìn)行還原反應(yīng)。
操作說(shuō)明
注意事項(xiàng)：
· 還原發(fā)生在較寬的pH（pH 4.0-9.0）和溫度范圍（5°-95°C）內(nèi)。
· 大多數(shù)蛋白質(zhì)可以在不使用變性劑的情況下有效還原。然而，添加變性劑如6M鹽酸胍，將有助于將內(nèi)部二硫化物暴露出來(lái)，與固定的TCEP反應(yīng)，確保完全還原。不建議使用尿素作為變性劑，因?yàn)樗鼤?huì)產(chǎn)生與巰基反應(yīng)的氰酸鹽。
· 在還原過(guò)程中，樣品緩沖液中加入5-20 mM EDTA可防止二價(jià)離子（例如Zn2+，Cu2+和Mg2+）使巰基再氧化。
· 由于二硫化物會(huì)隨著時(shí)間的推移而再生，因此還原后的樣品應(yīng)在還原后立即使用。
· TCEP固定的磁珠僅為一次性使用產(chǎn)品。
以下方案是二硫化物還原的一個(gè)例子。為了獲得最佳結(jié)果，我們建議進(jìn)行滴定以?xún)?yōu)化每次實(shí)驗(yàn)所用的磁珠量。該協(xié)議可以按比例放大/縮小。
緩沖液：
? 20Mm EDTA
? dH2O（Milli-Q超純水）
設(shè)備
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Item |
Source |
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磁力分離器
**根據(jù)樣品體積，用戶(hù)可以選擇以下磁力分離器之一 |
l BcMag? separator-2 適用于兩個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01); l BcMag? separator-6 適用于六個(gè)單獨(dú)的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02); l BcMag? separator-24 適用于24個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03); l BcMag? separator-50 適用于1個(gè)單獨(dú)的50毫升離心管，1個(gè)單獨(dú)的15毫升離心管, 以及4個(gè) 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
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BcMag 96孔磁力分離器 |
l BcMag 96-well Plate Magnetic Separator (side-pull,) 或者 96-well PCR plate 和 96-well microplate, 或其他兼容的磁力分離器(Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調(diào)單通道和多通道移液器 |
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操作過(guò)程
A. 磁珠制備
1. 用用dH2O懸浮所需用量的磁珠，最終濃度為50 mg/ml。
注意：為了獲得最佳效果，請(qǐng)現(xiàn)配現(xiàn)用磁珠。懸浮的磁珠可以在4oC下保存一周而不會(huì)降低活性。
2. 使用前搖動(dòng)或渦旋試劑瓶，以完全懸浮磁珠。
注意：在分配之前，不要讓磁珠放置超過(guò)2分鐘。
B. 樣品制備
1. 將所需量的磁珠轉(zhuǎn)移到離心管中。
注意：優(yōu)化每個(gè)實(shí)驗(yàn)使用的磁珠數(shù)量。通常，對(duì)于30-50μl蛋白質(zhì)/多肽樣品（50-80μg），需使用30-50μl（3mg-5mg磁珠）的TCEP二硫化物還原磁珠。
2. 將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，直到上清液變清。在試管保持在磁力分離器上的同時(shí)，除去上清液。
3. 加入樣品，并通過(guò)緩慢上下移液25次（一分鐘）或通過(guò)渦旋混合器以2000 rpm的速度完全混合5分鐘，混勻樣品。
4. 將它們?cè)谑覝叵?/span>，溫和旋轉(zhuǎn)孵育1小時(shí)。
5. 將試管放在磁力分離器上1-3分鐘，直到上清液變清。在試管保持在磁力分離器上的同時(shí)，除去上清液。
故障排除
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問(wèn)題 |
可能的原因 |
建議 |
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樣品還原不良 |
使用的磁珠數(shù)量較少 |
使用推薦量的磁珠 |
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孵育時(shí)間太短。 |
增加孵化時(shí)間 |
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蛋白質(zhì)中的二硫化物在空間上未能與磁珠表面TCEP接觸。 |
向還原緩沖液中加入6 M鹽酸胍。 |
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孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)。 |
不要超過(guò)2小時(shí)的孵化時(shí)間 |
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磁珠還原能力降低 |
該產(chǎn)品已保存超過(guò)一年。 |
購(gòu)買(mǎi)新產(chǎn)品 |
參考文獻(xiàn)
1.Zwyssig A, Schneider EM, Zeltner M, Rebmann B, Zlateski V, Grass RN, Stark WJ. Protein Reduction and Dialysis-Free Work-Up through Phosphines Immobilized on a Magnetic Support: TCEP-Functionalized Carbon-Coated Cobalt Nanoparticles. Chemistry. 2017 Jun 27;23(36):8585-8589.
2.Tzanavaras PD, Mitani C, Anthemidis A, Themelis DG. On-line cleavage of disulfide bonds by soluble and immobilized tris-(2-carboxyethyl)phosphine using sequential injection analysis. Talanta. 2012 Jul 15;96:21-5.
3.Han J, Clark C, Han G, Chu TC, Han P. Preparation of 2-nitro-5-thiobenzoic acid using immobilized Tris(2-carboxyethyl)phosphine. Anal Biochem. 1999 Mar 15;268(2):404-7.
4.Han, J.C., et al. A procedure for quantitative determination of tris(2-carboxyethyl)phosphine, an odorless reducing agent more stable and effective than dithiothreitol. Anal Biochem (1994) 220:5-10
