產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
一步游離生物素清除試劑盒
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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BJ101 |
BcMag? 一步法生物素清除磁珠 |
1 ml |
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BJ102 |
BcMag? 一步法生物素清除磁珠 |
5 ml |
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產(chǎn)品信息 |
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組成 |
二氧化硅基質(zhì)，表面覆蓋有高密度專有化學(xué)基團的磁珠 |
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穩(wěn)定性 |
短期保存 (<1小時): pH 3-11; 長期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 可溶于大多數(shù)有機溶劑 |
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磁化強度 |
~40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁 |
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成分 |
100 mg / ml溶于 0.2 M磷酸鈉，pH7.5，0.3 M NaCl |
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儲存 |
室溫運輸，收到后保存在 4°C . |
簡介
生物素，也稱為維生素H，是一種在生物樣品中不常見的小分子。它對抗生物素蛋白（Ka=10 ^ 15）和鏈霉親和素（Ka=10 ^ 14）具有顯著的結(jié)合能力，使得生物素化分子如蛋白質(zhì)或其他分子對于靶分子的非放射性檢測和純化非常適用。
生物素化是一種使用酶或化學(xué)方法將生物素共價連接到蛋白質(zhì)，核酸，碳水化合物或其他分子上的過程。該過程的目的是將生物素分子連接到一個分子上，產(chǎn)生了一個附著有生物素的生物素化分子。然而，生物素化過程后樣品中可能會殘留一定量的游離生物素，這可能導(dǎo)致非特異性結(jié)合并導(dǎo)致高背景影響。因此，從樣品中去除游離生物素對于成功的下游應(yīng)用至關(guān)重要。
為了消除樣品中過量的生物素，通常使用透析或離心柱等常規(guī)技術(shù)。然而，這些方法有一定的缺點，包括由于蛋白質(zhì)沉淀，多重緩沖液交換，轉(zhuǎn)移步驟，長時間的操作過程以及難以進行小體積樣品或高通量自動化而導(dǎo)致樣品丟失。
為了克服這些問題，我公司開發(fā)了一種新的高效生物素去除方式。
BcMag ? 一步法游離生物素清除試劑盒使用經(jīng)過專有化學(xué)修飾的磁珠從樣品中去除游離生物素。磁珠可以快速有效地從超低體積的蛋白質(zhì)/多肽或DNA/RNA溶液中去除游離生物素。磁珠還可以在不到10分鐘的時間內(nèi)同時處理96個樣品。
使用磁珠快速有效地從樣品中去除游離生物素的操作非常簡單。
1將磁珠直接添加到樣品中。
2通過移液或渦旋，捕獲游離生物素。
3將磁珠與蛋白質(zhì)或DNA/RNA的溶液通過磁性分離，而蛋白質(zhì)或DNA/RNA保留在溶液中。
與標(biāo)準(zhǔn)滴注柱和分批方法相比，操作簡單的磁珠法顯著改善了實驗結(jié)果，將蛋白質(zhì)損失降低到最?。?/span><10%）。由于僅使用少量磁珠，因此樣品的最終蛋白質(zhì)濃度不會顯著降低。
特點和優(yōu)勢
l 簡單的方案：無需液體轉(zhuǎn)移，一管，一步，一分鐘操作方案
l 操作方便
l 可靠且可重復(fù)的結(jié)果，極高的回收率>90%，蛋白質(zhì)（>6 kDa，抑肽酶）或DNA/RNA（>25-mer dsDNA）
l 極佳的清除效果：去除95%游離生物素
l 成本效益：無需使用色譜柱、過濾器和費力的重復(fù)移液
l 高通量：與許多不同的自動化液體處理系統(tǒng)兼容
使用協(xié)議
使用者需準(zhǔn)備材料
A．儀器
l 磁力架（適用于手動操作）
BcMag? separator-2 適用于兩個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6 適用于六個單獨的1.5毫升離心管 (Bioclone, Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24 適用于24個單獨的1.5-2.0 ml離心管 (Bioclone, Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50 適用于1個單獨的50毫升離心管，1個單獨的15毫升離
心管, 以及4個 1.5毫升 離心管 (Bioclone,Cat.# MS-04）
l 用于大規(guī)模純化的康寧430825細胞培養(yǎng)瓶（Cole Parmer，目錄號EW-01936-22）
操作過程
以下實驗僅為個例。磁珠和樣品體積可以合理放大（或縮?。?。不要使用含有有機溶劑的緩沖液。
1震動試劑瓶，使磁珠完全重新懸浮，直至均勻。
重要提示：
l 分液前必須將磁珠混合。
l 在分液完成前，不要讓磁珠溶液靜置停留超過2分鐘。每2分鐘重新懸浮一次磁珠。
2.向含有游離生物素的樣品中加入適量的磁珠。
重要提示：用戶需要根據(jù)磁珠結(jié)合能力（約1500 pmol生物素/ml磁珠**），優(yōu)化磁珠和游離生物素樣品的加入比例。結(jié)合能力測定條件：將10μl磁珠（100 mg/ml）與100μl含有生物素的蛋白質(zhì)樣品（人血清的1:400稀釋液）在0.1M磷酸鈉，0.15M NaCl，pH7.5緩沖液中混合，并以2000 rpm渦旋5分鐘）
3將樣品與磁珠混合1-2分鐘，緩慢上下移液20-25次，或在PCR板上以2000 rpm旋轉(zhuǎn)5分鐘，或在微孔板上以800 rpm旋轉(zhuǎn)5分鐘。
重要提示：如果使用渦旋混勻器，用戶應(yīng)優(yōu)化渦旋速度和時間。
4將樣品板或試管放在磁力分離器上30秒或直到溶液澄清。
5將樣品板保持在磁分離器上，把上清液轉(zhuǎn)移到干凈的板/管中。該樣本已純化好用于下游應(yīng)用。
