產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
DADPA活化磁珠
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
產(chǎn)品規(guī)格 |
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FA105 |
1μm BcMag?DADPA活化磁珠 |
150 mg |
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FA106 |
1μm BcMag? DADPA活化磁珠 |
300 mg |
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FA107 |
5μm BcMag? DADPA活化磁珠 |
150 mg |
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FA108 |
5μm BcMag? DADPA活化磁珠 |
300 mg |
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如需大量訂購，請聯(lián)系我們報價！ |
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產(chǎn)品屬性 |
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組成 |
表面連接有DADPA基團的，二氧化硅包覆氧化鐵的磁珠 |
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磁珠大小 |
1μm~直徑；5μm~直徑 |
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磁珠數(shù)量 |
? 約1.68 x 109磁珠/毫克（1微米磁珠） ? 約5 x 107磁珠子/毫克（5微米磁珠） |
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表面積 |
約100m2/克 |
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穩(wěn)定性 |
短期（<1小時）：pH 3-11；長期：pH 4-10 溫度：4°C-140°C；大多數(shù)有機溶劑 |
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磁力大小 |
40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5克/毫升 |
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濃度 |
20mg/ml（1mM ETDA，pH 7.0） |
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官能團密度 |
1μm磁珠 |
約200摩爾/克珠子 |
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5μm磁珠 |
約180摩爾/克珠子 |
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存儲 |
在4°C下保存，收到后避光、防潮 |
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類固醇/藥物/染料結(jié)合方案
對于缺乏易反應(yīng)官能團的分子，使用傳統(tǒng)方法固定可能很困難。特別是某些藥物，類固醇，染料和其他小化學(xué)分子通常具有缺乏用于固定的適當(dāng)反應(yīng)基團的結(jié)構(gòu)。其他化合物具有低反應(yīng)性官能團或被空間抑制。然而，其中一些化合物含有活性（或可替代）氫，可以使用曼尼希方法與甲醛和胺縮合。
曼尼希反應(yīng)誘導(dǎo)的固定化
曼尼希反應(yīng)被定義為甲醛（或另一種醛）與氨和另一種含有活性氫的分子的縮合。該反應(yīng)可以用伯胺，仲胺甚至酰胺胺代替氨進行。當(dāng)在該過程中使用二氨基二丙胺（DADPA）樹脂作為伯胺時，發(fā)生配體固定化。
類固醇/藥物/染料結(jié)合方案
BcMag? 類固醇/藥物/染料綴合方案使用DADPA封端的磁珠通過曼尼希反應(yīng)誘導(dǎo)的固定化有效綴合缺乏易反應(yīng)性官能團的化合物，例如類固醇，染料和藥物。BcMag公司? DADPA封端的磁珠是均勻的二氧化硅基超順磁珠，表面涂有高密度的DADPA（二氨基二丙胺）官能團。由于不存在或不可接近易反應(yīng)的官能團，使用現(xiàn)有方法難以或不可能固定類固醇，染料，藥物和其他微小化合物。然而，這些小分子可以通過其在曼尼希反應(yīng)中與甲醛和胺縮合的活性氫固定在DADPA封端的磁珠上。
特點和優(yōu)勢：
· 高結(jié)合能力
· 快速、高效耦合
· 親水性長臂間隔物最小化空間位阻和非特異性結(jié)合。
協(xié)議
注意：
? 以下方案是將含胺配體偶聯(lián)至BcMag的示例? DADPA封端的磁珠。該協(xié)議可以相應(yīng)地放大和縮小。強烈建議滴定以優(yōu)化每次應(yīng)用所需的珠子數(shù)量。
? 偶聯(lián)緩沖液或配體不應(yīng)含有任何氨基（例如Tris）或甲?；?/span>
? 由于溶液相聚合，含有配體的偶聯(lián)效率非常低。
所需材料
? 偶聯(lián)緩沖液：0.1 M MES，0.15 M NaCl，pH 4.7
? 洗滌緩沖液：0.1 M Tris，pH 8.0
? 偶聯(lián)劑：37%甲醛
? 磁架（用于手動操作）：根據(jù)樣品體積，用戶可以選擇以下磁架之一：BcMag rack-2用于容納兩個單獨的1.5 ml離心管（目錄號#MS-01）；BcMag rack-6用于容納六個單獨的1.5 ml離心管（目錄號#MS-02）；BcMag rack-24用于容納二十四個單獨的1.5-2.0 ml離心管（目錄號#MS-03）；BcMag rack-50用于容納一個50毫升離心管，一個15毫升離心管和四個單獨的1.5毫升離心管（目錄號#MS-04）；BcMag公司? rack-96用于固定96 ELISA板或PCR板（目錄號#MS-05）。
A. 樣品制備
1. 如果可溶，將1-10mg配體溶解在1ml偶聯(lián)緩沖液中。如果不溶，將其溶解在0.5 ml 100%乙醇中，然后加入0.5 ml偶聯(lián)緩沖液，制成50%乙醇/緩沖液。（注意：如果使用乙醇進行偶聯(lián)，則在添加樣品之前，必須用50%乙醇洗滌磁珠。）
B、 磁珠制備
1. 搖動瓶子以完全重懸珠子，并將30 mg磁珠轉(zhuǎn)移到離心管中。
2. 將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時除去上清液。從支架上取下試管，并通過渦旋將珠子用1 ml偶聯(lián)緩沖液重懸30秒。
3. 重復(fù)步驟2兩次。
C. 聯(lián)軸器
1. 將來自A1和100μl偶聯(lián)試劑的樣品加入洗滌過的磁珠中，充分混合，并在38-60℃下連續(xù)旋轉(zhuǎn)孵育>48小時。
注意：用戶應(yīng)憑經(jīng)驗確定最佳偶聯(lián)反應(yīng)時間和溫度。
2. 如B2所述，用1ml偶聯(lián)緩沖液洗滌磁珠四次，然后用dH2O洗滌兩次。
注意：
如果不溶性配體在50%乙醇中綴合，則珠子應(yīng)用50%乙醇洗滌三次，dH2O洗滌兩次，100%乙醇洗滌兩次，最后用dH2O洗滌兩次。
3. 將珠子重懸于含有0.05%疊氮化鈉的所需緩沖液中，并將其保存在4℃。°
D. 通用親和純化方案
1. 將最佳量的珠子轉(zhuǎn)移到離心管中。將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時除去上清液。
注意：
· 強烈建議根據(jù)粗樣品中目標(biāo)蛋白的量進行滴定，以優(yōu)化每次應(yīng)用所使用的珠子數(shù)量。使用過多的磁珠會導(dǎo)致較高的背景，而使用過少的磁珠會導(dǎo)致較低的產(chǎn)率。每毫克共軛磁珠通常與1-20μg靶蛋白結(jié)合。
2. 取出試管，通過渦旋將珠子用5床珠子體積的PBS緩沖液重懸30秒。將試管在室溫下放置1-3分鐘。將試管放在磁性支架上1-3分鐘。在管保持在支架上的同時除去上清液。
3. 重復(fù)步驟2兩次
4. 將洗滌過的珠子添加到含有目標(biāo)蛋白的粗樣品中，并在室溫或所需溫度下孵育1-2小時（較低的溫度需要較長的孵育時間）。
5. 用5床珠子體積的PBS緩沖液或1M NaCl充分洗滌珠子，直到280 nm處洗脫的吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
6. 通過適當(dāng)?shù)姆椒ㄏ疵摪械鞍?，例如?/span>pH（2-4），高pH（10-12），高鹽，高溫，親和洗脫或在SDS-PAGE上樣緩沖液中煮沸。
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