產品中心
PRODUCT CENTER
可分離式甲苯磺酰基磁珠
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貨號 |
產品名稱 |
產品規(guī)格 |
價格（美元） |
訂單 |
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IR101 |
1μm BcMag?可分離式甲苯磺?；胖? |
150 mg |
375 |
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IR102 |
1μm BcMag?可分離式甲苯磺?；胖? |
300 mg |
650 |
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IR103 |
2.5μm BcMag?可分離式甲苯磺?；胖? |
150 mg |
375 |
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IR104 |
2.5μm BcMag?可分離式甲苯磺?；胖? |
300 mg |
650 |
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如需大量訂購，請聯系我們報價！ |
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產品屬性 |
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組成 |
表面連接有高密度可分離式甲苯磺酰基的磁珠 |
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磁珠數量 |
約1.68 x 109磁珠/毫克（1um磁珠） 約5 x 107磁珠/毫克（5um磁珠） |
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穩(wěn)定性 |
短期（<1小時）：pH 3-11；長期：pH 4-10 溫度：4°C-140°C；大多數有機溶劑 |
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磁力大小 |
40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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狀態(tài) |
凍干粉 |
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官能團密度 |
1μm磁珠 |
約245μmole/g磁珠 |
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2.5μm磁珠 |
約230μmole/g磁珠 |
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存儲 |
收到后儲存在-20℃ |
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BcMagTM可分離式甲苯磺?；罨胖?/span>是表面覆蓋有高密度甲苯磺?；倌軋F的二氧化硅基質的磁珠。甲苯磺?；罨胖榭梢栽诓灰肴魏坞姾傻那闆r下，在水或有機溶劑（30%DMF）中有效地共價結合含有伯胺基的配體。因為活性醛基基團通過內置的可切割二硫鍵連接物（圖1）與磁珠連接，因此，可用還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）從磁珠上切割并分離出目標分子-配體的復合物。可分離式甲苯磺酰基磁珠是結合大分子蛋白和多肽的理想選擇。
甲苯磺酰基活化磁珠是將抗體，多肽，完整蛋白質和功能酶共價連接到磁珠表面的理想選擇。固定化的磁珠由于其低背景和抗體與磁珠表面的共價結合，而廣泛用于蛋白質和蛋白質復合物的免疫沉淀。
甲苯磺?；罨?/span>磁珠偶聯反應在37℃下進行，pH范圍在偏堿性環(huán)境。我們建議在pH 8.5-9.5下偶聯，但與高pH不穩(wěn)定配體的偶聯可以在pH 7.4的替代緩沖液中進行。
產品獨特的干燥狀態(tài)避免了丙酮溶劑儲存的麻煩，或液體去除和處理的需要。此外，由于干基質在膨脹時濃縮樣品，減少了起始材料的體積，并且會提高配體固定化的效率，因此它非常適合與濃度較低樣品進行偶聯反應。
工作流程
本磁珠作為固體載體可以完美地用于各種親和純化，將分子，細胞和部分細胞進行純化。只需要與配體結合后，將磁珠添加到含有目標分子的溶液中，然后混合，孵育，清洗和洗脫目標分子（圖2）
特點和優(yōu)勢：
l 預活化，即用型磁珠
l 含有一個可切割的內置二硫鍵，可將配體-目標分子復合物從磁珠中分離出來。
l 便于使用
l 結和后表面不會帶電荷
l 穩(wěn)定的共價鍵，低水平的配體泄漏
l 可重復使用的免疫親和基質
l 極低的非特異性結合率
l 可固定1-10mg蛋白或0.1-1mg多肽/ml的磁珠
l 用途：用于純化抗體，蛋白質/肽，DNA / RNA;細胞篩選、免疫沉淀
操作過程
提示：
l 強烈建議在實驗過程中進行滴定優(yōu)化，以確定每個實驗中應用的磁珠數量。該協(xié)議可以相應地放大和縮小。
l 避免使用含有還原劑、tris或其他含有伯胺或其他親核類試劑的緩沖液，因為它們會破壞二硫鍵連接物或與預期的偶聯反應競爭。但wash buffers和 storage buffers 可含有氨基或羧基成分。
所需耗材
1.磁力分離器（適用于手動操作）：根據實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號的磁力分離器：
BcMag? separator-2可以容納兩個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01);
BcMag? separator-6可以容納六個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02);
BcMag? separator-24可以容納24個單獨的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03);
BcMag? separator-50可以容納一個單獨的50 ml離心管，一個15ml的離心管，以及四個1.5ml離心管(Cat.# MS-04);
BcMag? separator-96 可以配合96 ELISA板使用 (Cat.#MS-05).
2.Coupling Buffer: 0.1 M磷酸鈉緩沖液，pH 7.4
提示：
l coupling buffers應具有最小的離子強度，且不應含有任何具有氨基（如Tris）的成分。但wash buffers 或者storage buffers可含有氨基或羧基。
l 水不溶性配體可以在含有30%有機溶劑（30%DMF）的coupling buffers中結合。
3. Blocking Buffer: PBS pH 7.4 含有 0.5% (w/v) BSA
4. Washing buffer: PBS pH 7.4含有 0.1% (w/v) BSA
A.磁珠的準備
1.用100%異丙醇制備3%的磁珠（30 mg/ml），并充分混合。
提示：將未使用的磁珠可以在異丙醇溶液中，儲存在4℃?？杀４嬉荒陼r間。
2.將100μl（3mg）的磁珠轉移到離心管中。
3. 將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當磁珠完全沉淀時，去除上清液。從磁力分離器上取下試管，加入1ml的coupling buffer用通過渦旋30秒重新懸浮磁珠。
4.重復步驟3 兩次。
5.去除上清液，將清洗的磁珠準備進行耦合反應。
注：使用coupling buffer重新水化后，由于官能團的穩(wěn)定性，應盡快使用磁珠。
B.蛋白質結合
1.用coupling buffer制備100μl蛋白質溶液（0.5-1mg/ml）或多肽溶液（200μmol/ml）。
提示：偶合效率因配體而異。用戶可應根據經驗優(yōu)化配體的濃度。
2. 將蛋白質或者多肽溶液與上述清洗過的磁珠混合，通過渦旋或者吹吸的方式。
3. 孵育反應，在20-25℃溫度下偶合至少需要24-48小時。在4℃下耦合時，培養(yǎng)時間
應至少延長至48-72小時。
4. 用1ml的washing buffer將磁珠洗滌3次。
5. 向磁珠中添加1ml的blocking buffer，并在室溫下孵育1小時或4℃過夜。
6. 用1 ml的PBS洗滌磁珠4-6次。
7. 用含有0.1%疊氮化物（w/v）的PBS緩沖液重新懸浮磁珠至所需濃度，在
4°C下儲存，直至使用。不要冷凍保存。
C．常見親和純化過程
提示：
l 該方案是一個通用的親和純化發(fā)法。因為沒有兩種蛋白質是完全相同的，所以不可能為所有的蛋白質純化設計一個通用的協(xié)議。為了獲得最佳結果，每個用戶必須確定純化單個目標蛋白的最佳工作條件。
l 避免在binding buffers 和 washing buffers中使用還原劑。
l 強烈建議根據粗樣品中目標蛋白質的含量，進行滴定，以優(yōu)化每個單獨實驗
中使用的磁珠數量。使用過多的磁珠將導致較高的背景，而使用過少的磁珠將導致較低的產量。每毫克磁珠通?？膳c1-20μg靶蛋白結合。
1.將適量的珠子轉移到離心管中。將管放在磁力分離器上1-3分鐘。當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
2. 取下試管，加入5倍磁珠溶液體積的PBS緩沖液，通過震蕩重新懸浮磁珠，渦旋30
秒。將試管至于室溫環(huán)境1-3分鐘，再將管放在磁力分離器上1-3分鐘。當磁珠完全
沉淀時，去除上清液。
3.重復步驟2 兩次。
4. 向含有目標蛋白質的粗樣品中添加洗滌過的磁珠，并在室溫或所需溫度下溫浴1-2小
時（溫度越低，培養(yǎng)時間越長）。
提示：強烈建議進行滴定實驗以優(yōu)化培養(yǎng)時間。因為孵化的時間太長可能會導致很高的背景。
5. 用5倍磁珠體積的PBS緩沖液或1M NaCl徹底清洗磁珠，直到280nm處洗脫液的吸光度接近背景水平（OD 280<0.05）。
提示：添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑也可能會降低非特異性背景。例如，向洗滌緩沖液中添加NaCl（濃度為1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X-100或Tween-20，以及還原劑，如DTT或TCEP（我們通常使用3mM）。
6. 通過適當的方法，如低pH（2-4）、高pH（10-12）、高鹽、高溫、親和洗脫或SDS-PAGE加載緩沖液中煮沸，洗脫目標蛋白。
7.切斷二硫鍵
提升：由于配體之間的構象不同，用戶應確定最佳工作條件，如還原劑、pH值和溫度，以切割單個配體的二硫鍵。以下是從磁珠上切割共軛的GFP蛋白的示例。
1）在140 mMβ-巰基乙醇或5 mM DTT（二硫蘇糖醇）中孵育磁珠（30mg/ml）。
a. 在 100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 140 mM β-巰基乙醇條件下，室溫2小時或
者過夜孵育，或者在98℃條件下5分鐘。
b. 在100 mM Tris-HCl, pH 8.0, 50 mM EDTA, 5mM DTT條件下，室溫2小時或者過夜孵
育，或者在98℃條件下5分鐘。
