產品中心
PRODUCT CENTER
硼酸鹽親和磁珠
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貨號 |
產品名稱 |
產品規(guī)格 |
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EC101 |
BcMag? 硼酸鹽基磁珠 |
250 mg |
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EC102 |
BcMag?硼酸鹽基磁珠 |
500 mg |
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產品屬性 |
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組成 |
間氨基苯基硼酸鹽連接的二氧化硅包覆磁珠 |
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磁珠大小 |
直徑5μm |
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磁力大小 |
40-45 EMU/g |
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磁化類型 |
超順磁性 |
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有效密度 |
2.5g/ml |
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狀態(tài) |
凍干粉 |
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結合能力 |
~2μmol硼酸鹽/mg磁珠 |
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存儲 |
收到后，儲存在4C° |
親和純化法是分離生物化合物的常用方法。其中，硼酸鹽親和層析是一種非常獨特的純化技術，因為在基質上連接的配體（間氨基苯基硼酸），在pH 8-9下可以特異性和可逆性地結合，含有順式二醇鄰二醇化合物的物質，并在pH 3-4條件下，在含有山梨醇的緩沖液中將其分離出去（圖1）。硼酸鹽親和樹脂可以從復雜生物樣品（如人血清）中有效富集含順二醇化合物（如醇類、核苷、核苷酸、核酸、碳水化合物、糖蛋白和酶）的有效實驗工具。盡管目前有大量的基于硼酸鹽親和性質的不同材質產品（如純化柱）可用，但這些產品存在操作程序繁瑣、耗時，并且無法處理非常微小體積的樣品（如癌細胞靶向和單細胞分析）等缺點。我們開發(fā)了一種全新的、有效的磁力親和系統來克服這些限制。
BcMagTM Boronate Affinity Magnetic Beads是均勻的，二氧化硅包裹氧化鐵的超順磁珠，表面連接有高密度硼酸基團。該磁珠作為固體材料，可以完美地用于含順二醇化合物的各種親和純化。由于其含有磁性，磁性材料可以很容易地適應高通量分析的自動化系統。
操作流程
親和純化操作方法非常簡單（圖1）。1.將磁珠直接添加到樣品中。2.吹吸或旋渦混勻，以捕獲目標生物分子。3.從樣品中用磁力分離磁珠。4.洗滌磁珠，以去除非特異性結合的分子。5.洗脫目標分子。這款便于操作的磁珠顯著改善了實驗結果，其對小體積樣本的操作結果，普遍優(yōu)于標準滴柱法和分批法。
特點及優(yōu)勢
l 操作簡單，易于使用
l 極低的非特異性結合
l 非常高的結合容量和在溫和條件下洗脫結合的含有鄰位二醇基的分子
l 易于使用
l 可靠的，可重復性的實驗結果
l 性價比高：無需純化柱、過濾器和費力的重復移液過程
l 適用于高通量：與許多不同的自動化液體處理系統兼容
操作協議
使用者需準備材料
· Binding/Wash Buffer: 50 mM HEPES, pH 8.5
提示：對于某些糖蛋白，向Binding/Wash Buffer中添加20-50 mM Mg2+，可以提高磁珠對它的結合能力。但是，這種方式也可能會導致更高的非特異性結合。因此，我們建議進行滴定以優(yōu)化Mg2+的濃度。
· Elution Buffer:100 mM 山梨醇, 50 mM HEPES, pH 8.5
磁力分離器
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Item |
Source |
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離心管式磁力分離器
** 根據實驗時生物樣品的體積，使用者可以選擇一下不同型號的磁力分離器 |
· BcMag? separator-2可以容納兩個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-01); · BcMag? separator-6可以容納六個單獨的1.5 ml離心管(Cat.# MS-02); · BcMag? separator-24可以容納24個單獨的1.5-2.0 ml離心管(Cat.# MS-03); · BcMag? separator-50可以容納一個單獨的50 ml離心管，一個15ml的離心管，以及四個1.5ml離心管(Cat.# MS-04); |
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BcMag 96孔磁力分離器. |
· BcMag 96-孔磁力分離器(單面) 可與96孔PCR板和96孔微孔板或其他型號離心板兼容使用 (Blioclone, Cat#: MS-06) |
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可調式單通道和多通道移液器 |
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實驗過程
重要提示：
l 以下方案是糖蛋白純化的實例。強烈建議在實驗過程中進行滴定優(yōu)化，以確定每個實驗中應用的磁珠數量。該協議可以相應地放大和縮小。
l 不要使用含有有機溶劑的緩沖液。
A.磁珠的準備
1.用Binding/Wash Buffer將磁珠重新懸浮至50mg/ml。
l 提示：分液前將磁珠混勻是非常重要的步驟，不要讓混勻的磁珠靜置超過兩分鐘，使用時每兩分鐘混勻一次磁珠
2.向試管中加入適量的磁珠，將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當磁珠完全沉淀時，
去除上清液。
3.取下試管，用10倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。將試管在室溫下放
置2-3分鐘。再將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
4.重復步驟3一次。
5.取下試管，用10倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。將試管放在磁力分
離器上1-3分鐘。當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
6.重復步驟5一次。
7.用1倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。
B.樣品的結合技清洗
1.用15倍體積的Binding/Wash Buffer稀釋樣品。
2.將清洗過的磁珠添加到稀釋樣品中，用移液器吹吸將磁珠充分混合，并在室溫下輕輕震動10分鐘。
3.將試管放在磁力分離器上1-3分鐘。當磁珠完全沉淀時，去除上清液。
4.從磁力分離器中取出試管，并用15倍體積的Binding/Wash Buffer洗滌磁珠。
5.重復步驟3-4，直到280nm處的吸光度接近0.001。
6.用1倍體積的Binding/Wash Buffer徹底重新懸浮磁珠。
C.洗脫
1.從磁力分離器上取下試管
2.用10-20μl的 Elution Buffer重新懸浮磁珠，通過上下吹吸移液20-30次洗脫目標生物分子。
3.將試管放置在磁力分離器上1-3分鐘，并將含有洗脫蛋白的上清液轉移到新試管中。
D.問題排除
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問題 |
可能原因 |
建議 |
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回收率低 |
Binding buffer或者樣品中的pH 值不在 8.0–8.5范圍內. |
檢查結合緩沖液和樣品pH值，確保其在8.0–8.5范圍內 |
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不結合 |
一些特異性糖基化蛋白與磁珠結合性不好。 |
向結合緩沖液中添加額外的最佳濃度的Mg2+ |
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非特異性結合 |
l 添加到樣品中的磁珠過多 l 清洗不夠充分 l 樣品中含有糖類，或非目標分子的含有鄰二醇基團的分子。 |
· 優(yōu)化樣品與磁珠的添加比例 · 洗滌樣品直至280nm處的吸光度接近0.001。 · 增加Binding/Wash Buffer中的NaCl濃度 · 運行PD-10純化柱以除去低分子量多糖。 |
