產(chǎn)品中心
PRODUCT CENTER
NHS鋱熒光磁珠
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Cat. No. |
Product Name |
Unit Size |
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GQ101 |
2.5 μm BcMag? NHS-Activated Terbium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GQ102 |
2.5 μm BcMag? NHS-Activated Terbium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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GQ103 |
5 μm BcMag? NHS-Activated Terbium Fluorescence Magnetic Beads |
15 mg |
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GQ104 |
5 μm BcMag? NHS-Activated Terbium Fluorescence Magnetic Beads |
30 mg |
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Fluorescence dye properties
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Fluorophore |
Fluorescence color |
Excitation (nm) |
Emission (nm) |
Fluorescence lifetime (?) (μsec) |
Stokes shifts (nm) |
Selection of Emission Filter |
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Terbium (Tb3+) |
Green |
320 |
545 |
1050 |
220 |
545/40 |
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產(chǎn)品屬性 |
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磁珠大小 |
2.5μm 直徑; 或5μm直徑 |
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磁珠數(shù)量 |
~1.47 x 108 beads/mg (2.5μm) ~ 5 x 107 beads /mg (5μm) |
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穩(wěn)定性 |
短期保存 (<1 hour): pH 3-11; 長期保存: pH 4-10 溫度: 4°C -140°C; 大多數(shù)有機溶劑 |
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磁力大小 |
~40-45 EMU/g |
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磁力類型 |
超順磁性 |
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狀態(tài) |
凍干粉 |
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功能團密度 |
2.5μm Magnetic Beads |
~240 μmole / g of Beads |
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5μm Magnetic Beads |
~200 μmole / g of Beads |
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儲存 |
收到后，儲存在-20℃。 |
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BcMag ?NHS活化鋱熒光磁珠是在表面連接高密度NHS（N-羥基琥珀酰亞胺）官能團的時間分辨熒光（TRF）磁性微球。磁珠利用可靠的NHS酯進行化學固定，不需要使用危險化學品。而且本磁珠具有較低的非特異性結(jié)合率，并且不會造成偶聯(lián)配體的泄漏。通過形成穩(wěn)定的酰胺鍵（圖1），偶聯(lián)效率超過85%，該磁珠可以快速，有效地共價結(jié)合任何含伯胺的配體。Bioclone NHS活化磁珠反應僅需不到一個小時（在室溫pH 7-9下為15-30分鐘，在4°C下為4小時），就可以產(chǎn)生非常穩(wěn)定的連接。
胺基基團（-NH2）是固定蛋白質(zhì)分子最常見功能基團：該基團可以在每個多肽鏈（稱為α-胺）的N末端和賴氨酸（Lys，K）殘基（稱為ε-胺）的側(cè)鏈中找到。由于伯胺基團在生理條件下帶正電荷，因此它們通常分布在蛋白質(zhì)的外部（即在外表面）；所以在與它們結(jié)合過程中，不會使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)發(fā)生變性。
BcMag?NHS活化銪熒光磁珠結(jié)合了預活化的NHS基團、時間分辨熒光染料和磁力特性的優(yōu)勢，可以進行非常敏感的分析。磁珠的制造采用了納米級超順磁性氧化鐵和銪金屬作為核心，并完全封裝在高純度二氧化硅外殼中，確保不會出現(xiàn)氧化鐵和銪金屬的溶出問題。親水表面確保磁珠的非特異性吸附低，分散性好，易于在各種緩沖液中處理。
盡管傳統(tǒng)的熒光顯色技術(shù)在過去幾十年中得到了廣泛應用，但它們在適用性和效率方面仍存在一些局限性：1.激發(fā)帶較窄，背景信號強。2.斯托克斯位移較小，容易造成自熄現(xiàn)象。3.熒光對環(huán)境因素敏感，如金屬離子濃度、pH值、溫度和溶劑極性。4.熒光強度不足，不能檢測單個生物分子。5.熒光間歇性（閃爍）影響分子檢測的某些數(shù)據(jù)處理過程，造成誤差。6.由于疏水性，容易聚集。
BcMag? TR-FRET測定方法與傳統(tǒng)的FRET（F?rster共振能量轉(zhuǎn)移）測定方法不同，它利用時間分辨熒光磁珠（BcMag? TR-Magnetic Beads）作為熒光供體團。供體和受體可以是兩個蛋白質(zhì)、兩個DNA鏈、抗原、抗體或配體或其它受體。在一定的時間延遲后（通常為50至100秒），當供體和受體分子靠近并以時間分辨方式進行監(jiān)測時，通過熒光共振能量轉(zhuǎn)移產(chǎn)生信號。在BcMag? TR-FRET測定方法中，微量的分析物可以通過時間分辨磁珠輕松地從樣品中富集，從而提高靈敏度。該測定方法消除了由樣品和塑料微孔板引起的所有熒光背景影響，以及直接激發(fā)受體所產(chǎn)生的背景影響。因此，BcMag? TR-FRET測定方法的信噪比非常高，背景值非常低。此外，該測定方法不需要清洗步驟。BcMag? TR-FRET測定方法在高通量篩選的生物分析中具有顯著的優(yōu)勢，如測定靈活性、可靠性、提高測定靈敏度、更高的通量和更少的假陽性/假陰性結(jié)果。
鋱金屬絡合物熒光標記劑由于其獨特的特性而成為高效的熒光標記劑。它在320nm處激發(fā)，并在545nm處發(fā)出綠色熒光，具有較長的熒光壽命（1050微秒）和較大的斯托克斯位移（220nm）。利用這些特性，時間分辨熒光檢測可以顯著降低樣品的熒光背景，并提高信噪比，使其比傳統(tǒng)熒光染料具有更高一個數(shù)量級的檢測能力。BcMag? NHS 活化鋱熒光磁珠是TR-FRET測定中優(yōu)秀的供體材料。
TR-FRET磁性微球分析的工作流程（圖2）
1.將與抗體結(jié)合的供體磁珠與細胞裂解液混合，并在連續(xù)旋轉(zhuǎn)下孵育足夠的時間。在混合過程中，磁珠保持懸浮在樣品溶液中，使目標分析物能夠與供體磁珠結(jié)合。2. 孵育后，使用磁力架將磁珠從樣品中收集和分離。3. 添加與目標分析物結(jié)合的受體，并在連續(xù)旋轉(zhuǎn)下孵育足夠的時間。4. 多種微孔板讀數(shù)儀進行TR-FRET測定。
優(yōu)勢和特點：
1. 本款磁珠具有在一種磁珠上，可以同時表現(xiàn)出雙重功能的特點：分離/預濃縮和檢測分析物，能夠在同一磁珠上快速、簡便、穩(wěn)定和高通量地從復雜生物樣品中分析痕量分析物。
2. 超高的靈敏度。檢測限值低至10 pg/mL，而典型熒光測定的檢測限值為100 pg/mL。
3. 極高的光穩(wěn)定性和耐光漂白性。所有的鑭系螯合物或香豆素分子以及氧化鐵完全封閉在磁珠的內(nèi)部，而不僅僅是在磁珠表面上。這種保護環(huán)境可以防止氧化鐵和染料溶解到水介質(zhì)中，使磁珠對溶劑、溫度、pH等外部條件的敏感性降低。
4. 高熒光強度。由于單個磁珠含有高濃度的鑭系螯合物，并且鑭系螯合物本身具有40%到90%的高量子產(chǎn)率，因此磁珠具有超強的熒光強度，可顯著提高分析靈敏度，而無需信號放大。這種高亮度的磁珠也是時間分辨FRET分析的完美供體。
5. 鑭系螯合物或香豆素具有較大的斯托克斯位移（>250nm）、較窄的發(fā)射帶（-10nm帶寬）和較長的熒光壽命（μs），這大大降低了背景影響并提高了信號和干擾信號的比例。
6. 大多數(shù)生物檢測過程的ELISA測定可以轉(zhuǎn)化為HTRF測定。
7. 測定過程中無需清洗步驟。
8. 磁珠具有親水性二氧化硅表面，通過具有不同長度連接劑的不同功能基團進行接合，可高效地結(jié)合多種配體，如多肽、蛋白質(zhì)、抗體、小分子、碳水化合物、寡核苷酸、DNA/RNA等。
9. 由于磁珠的磁性特性，熒光磁珠非常適合于高通量自動化。
